正所谓墙倒众人推，鼓破万人捶。
在织田信长率残部逃回岐阜城还没多久，西美浓四人众为了能确保自己能在上杉将军家旗下得以本领安堵，就调集了三千余军势急袭岐阜城。
由于织田信长先前是倾巢而出，将能美浓一国以及南近江诸郡中可以调动的兵力都集中起来南下，使得岐阜城周边并没有多少兵力留守。
再加上织田军在败退岐阜城的途中还有不少开小差逃离的，使得岐阜城中眼下仅剩不足五百人的守军。
织田信长深知自己命不久矣，就打算让归蝶带着自己年幼的子女、家卷尽快逃离岐阜城，以免遭遇不测。
但令织田信长所没有料到的是，归蝶当即拒绝了织田信长的提议，反而要求与织田信长同生共死。
不仅如此，织田信长的亲信家臣丹羽长秀、金森长近、松井友闲、村井贞胜等人也没有在此刻抛弃织田信长，各率麾下武士扼守岐阜城的要地，誓死不降。
为了不让织田弹正忠家一脉彻底绝嗣，织田信长还是令家臣三泽秀次率十名武士护卫匆匆元服的织田信孝以及年幼的织田于次丸、秀姬、鹤姬等子女逃离岐阜城，令其于美浓、越前两国的境目地带白山、部子山等群山之中藏匿，在万不得已的时候退入越前一国。
而这时的安藤守就、不破光治、稻叶一铁、氏家直元等西美浓诸将为了自己的前程，自然不会对曾经的主君织田信长手下留情，毕竟他们已经先后背叛过斋藤道三、斋藤龙兴，如今再背叛一次织田信长也是轻车熟路。
西美浓诸将在率军包围了岐阜城后，不待八条政定率军抵达，就率先对岐阜城发起了攻击。
织田信长并不打算坐以待毙，反而从守军之中挑选出骁勇之士，并亲率五十名骑马武士以及一百名足轻主动出城迎击，趁着西美浓势在岐阜城外立足未稳之际，直接冲入了西美浓势的阵地，并来回冲杀，如入无人之境。
安藤守就、稻叶一铁、不破光治、氏家直元四人深知，若是他们输掉这一仗，就很难再获得上杉将军家重用以及本领安堵的机会，于是就率马廻众加入混战，向织田军发起反击，殊死奋战。
而织田信长麾下的这些骁勇之士也人人抱定背水一战的决心，所以打得异常顽强。
两军一直从中午苦战到黄昏，往来冲杀，难分胜负。西美浓势虽然占据兵力上的优势，但始终未能取得决胜的优势。
不过，此时的织田军也是强弩之末，丹羽长秀、金森长近、村井贞胜、森兰丸、服部六兵卫等诸多家臣先后在混战之中被西美浓势讨取。
织田信长也在战至力竭后与身边仅剩的三名骑马武士退回了岐阜城本丸的大广间之中，并在近习众之一的汤浅直宗介错下切腹自尽，享年三十七岁。
归蝶在织田信长切腹自尽后不久，用斋藤道三赠予的短刀自刎而亡，在自裁前下令汤浅直宗在岐阜城本丸的大广间放火，不能让西美浓诸将获得织田信长的首级。
在归蝶香消玉损后，汤浅直宗就趁着西美浓势尚未攻入本丸之际，在大广间四处点火，尤其是在织田信长的尸体旁堆上不少易燃之物，生怕西美浓诸将辨识出上织田信长的尸体。
不久后，汤浅直宗、松井友闲等家臣、小姓就在织田信长尸体不远处先后自刎而亡。
很快，岐阜城本丸的大广间就陷入一片红莲之中，这场大火烧毁的不仅仅是织田信长的尸体，同时也将他天下布武的野望彻底烧尽。
此时的西美浓诸将才率军攻破二之丸不久，急忙下令麾下军势灭火，并寻找织田信长的尸体，以免织田信长趁乱逃出岐阜城。
然而，西美浓势还是晚了一步。
等西美浓势将岐阜城本丸大广间里的大火扑灭，已经无法区分那十几具焦尸了。
为了泄愤，西美浓诸将就顺便对岐阜城的城下町进行滥妨狼藉，并将历经斋藤道三、斋藤义龙、斋藤龙兴、织田信长四人才好不容易经营成美浓一国最繁华的城下町付之一炬。
而后，西美浓诸将觉得此次讨取的首级太少，就不约而同地的想到了一个最为卑劣的办法——杀良冒功。
西美浓诸将为了掩盖自己对岐阜城城下町滥妨狼藉的罪行，就各率麾下军势对城下町的町民举起了屠刀。
短短三天之中，岐阜城城下町以及周边村落遇害者甚至达到了四千人以上。
曾担任斋藤道三、斋藤义龙、斋藤龙兴、织田信长佑笔的武井夕庵死里逃生，因其曾接待过出使织田家的八条家家臣的缘故，这才获得了东海道方面上杉军军奉行八条宪繁的庇护，并在之后得以面见总大将八条政定，控诉西美浓诸将于岐阜城周边所犯下的罪行。
八条政定虽然也派人调查确认了西美浓诸将所犯下的罪行，但鉴于长岛愿证寺与织田家家臣木下秀吉联合起来，仍与上杉将军家处于敌对状态，不能过早对西美浓诸将进行惩处。
因为织田信长死后，上杉将军家虽说迅速填补美浓一国的权力空白，将美浓一国兼并。但上杉将军家只是在形式上制服了美浓一国的国人领主，迫使他们俯首称臣罢了，上杉将军家在美浓实际的统治基础并不稳固。
不过，八条政定倒是派遣担任次席家老的八条能重以前往京都告捷的名义，将西美浓诸将于岐阜城周边犯下的罪行一并告知八条景定、上杉氏虎二人，由八条景定与上杉氏虎来下达对西美浓诸将的惩处。
之后，八条政定还派遣石川定光、宇都宫定纲、太田资胜等家中重臣分别率军进驻岐阜城、关城、革手城等地，以防美浓一国再度出现反复。
山岳崩颓，既覆危亡之运。
将本阵布置在小谷城最外围丁野丸的上杉氏虎有意劝降浅井长政，并许以美浓半国的领地。
浅井长政并没有答应，因没有妻儿在身边的缘故，他没有太多的顾忌，反而率一百余名城兵从小谷城本丸冲出，意图向上杉军发起最后的反击。